证实第三个论点，并且由此证明血液循环
静脉瓣这样排列的效果显然是阻止了所有来自心脏或大静脉的血液运行，无论是向上流向头，还是向下流向足，或者是流向双臂，一滴血也无法通过。通过静脉瓣，阻止了血液从大的静脉流向小的静脉的所有运行……
达·芬奇绘制的人体比例图
至此，我们已经讨论了身体躯干部流经心脏和肺的血量，以及在肢体及整个身体中从动脉流到静脉的血量。而且我们也解释了，血液以何种方式通过静脉从肢体流回心脏，静脉如何以及从什么途径将血液从外周带到中央部分的血管。我想三个有关血液循环的假设显得相当明晰，容易成立，而且可以让人们确信。现在，通过在静脉腔内发现的瓣膜，通过发现这些瓣膜的用途，通过可以观察的实验，完全搞清楚了其他的论点。
著名的阿夸彭登特的希隆尼缪斯·法布里修斯恰如里奥兰所称，是一位精明的解剖学家和一位可敬的老人，他和雅各布斯·希尔维斯（Jacobus Silvius）首先论述过静脉中的瓣膜，瓣膜由静脉中可以张弛的膜组成，极为精细，成半月形。这些瓣膜相距的距离不同，而且在不同的人当中，所处的位置也不一样；它们位于静脉腔边缘，朝向静脉干枝部。静脉瓣两瓣相对，或者说大部分静脉瓣两瓣相对，互相接触，而且以边缘相接触。假如什么东西要从静脉的干枝部分流向分支部分，或从大的静脉流向小的静脉，这些瓣膜便会阻挡。静脉瓣的排列是后面瓣膜的边膜对着前面瓣膜的中凹处，而前面瓣膜的边膜又对着更前面瓣膜的中凹处。
发现这些瓣膜的人并没有正确地理解这些瓣膜的用途，继他们之后的解剖学家也没有提供什么有识的新知识。通常认为这些瓣膜的重要作用是阻止血液流向身体的更低部分；由于颈静脉的瓣膜边缘下垂，因此便阻止了血液的上流，换句话说，静脉瓣并非都是朝下的，但总是朝向静脉干枝的方向，朝向心脏。我和其他人曾经在肾静脉和肠间膜中发现了静脉瓣，它们的边缘都是朝向大静脉和肝静脉的。还要说明一下，动脉中没有瓣膜，而且在狗和羊等动物中，静脉瓣存在于股静脉分支处，存在于骶骨顶端的静脉中，存在于腰腿分叉的静脉中，这些部位并不因直立而受引力的影响。颈静脉中的静脉瓣也并非像某些人所说是为了防止中风而设的，因为睡眠时头部很容易受到颈动脉中血液的影响。并不是因为静脉瓣的存在，血液可能滞留在分支静脉、小静脉干枝或微静脉分支中。静脉瓣也不可能阻止血液流入更为开放更为明显的血管中，因为在分支静脉中没有静脉瓣，而静脉瓣中常常存在于静脉分支交叉处。静脉瓣不是因为来自身体中心的血液流动缓慢而设的，因为血液本身流动的就很慢，要从大的静脉连续地流经小的血管，要从有大量血液的源头分开，要从热的部分流向冷的部分。
但是，由于静脉瓣的存在，才使血液无法从大的静脉流向小的静脉，从而防止了小静脉的破裂和膨大；静脉瓣的存在，使血液通过静脉从肢体流向身体的中心部分，而不是沿静脉从身体的中心部分流向肢体，不过静脉瓣的精细及其朝正确方向的轻易开放，完全阻止了反向的运动。由于静脉瓣的位置及排列，所以假如血液充溢，或者没有完全被上一个静脉瓣所阻止而流入到两个静脉瓣的缝隙处，便立刻被下面的静脉瓣边膜阻挡，这个静脉瓣与上面的静脉瓣相互衔接，这样便有效地阻碍了血液的继续倒行。
我在从事静脉解剖的工作中经常发现，如果我试图将一根探针从静脉的干枝通向小的静脉分支，我会看到，由于存在静脉瓣，因此无论如何不能将探针插得太远；而相比之下，沿着相反的方向，从外向内，或者说从静脉的分支向干枝静脉或静脉基部，却很容易插进探针。在静脉的许多地方，两个瓣膜就是这样的位置，以及如此适应，以至它们在静脉中间同时升起，而且它们通过边膜的接触结合，这种结合非常精确，致使用肉眼或其他实验手段都很难发现两个静脉膜接触之间的缝隙。但是假如这时将探针从外周伸向身体的中心部分，静脉瓣便像河上的水闸一样，非常轻易地打开了。静脉瓣这样排列的效果显然是阻止了所有来自心脏或大静脉的血液运行，无论是向上流向头，还是向下流向足，或者是流向双臂，一滴血也无法通过。通过静脉瓣，阻止了血液从大的静脉流向小的静脉的所有运行，而血液却可以从肢体更小的静脉流向较大的分支静脉，在一般情况下，这是自由开放的途径。
不过这一真理能够阐述得更清楚。让我们像放血时那样在肘上方将手臂系紧（图1.AA）。过以片刻，在静脉上，尤其是在劳动者的（较大）静脉上，会发现一些结成隆起（B、C、D、E、F）。这些结或隆起不仅存在于静脉分支处（E、F），而且也存在于静脉不分支处（C、D）。这些结或隆起是由静脉瓣形成的，是静脉瓣的外在表现。现在假如在一个静脉瓣的上方部位挤压血液，从H挤向O（图2），并用指尖深深地按住静脉，你将会看到没有血液从上方流过，手指尖与静脉瓣O之间的静脉将隐去，静脉瓣O上（O、G）的血管将持续扩张。血液被挤压出去，这段静脉便空了。如果你现在使用另一只手的手指按住静脉瓣O上方的静脉，并向下挤压，你会发现，你无法将血液挤过静脉。不过，当你再使劲挤压时，你会发现，按住静脉上方的手指与静脉瓣之间的静脉会更加膨胀，而静脉瓣以下的静脉部分则依然是空的（图3，H、O）。
所以，静脉瓣在静脉中的功能显然就像我们在主动脉和肺动脉起点处所看到的三个半月瓣的功能一样，是为了防止流过的血液倒流。
此外，依然缚紧手臂，使静脉显得饱满膨胀，假如你用指尖挤压静脉中的某一部位（图4，L），然后用另一只手的手指将血液上挤到另一个静脉瓣处，你会发现静脉的N段依然是空的，血液不能回流，很像我们在图2中已经看到的情况。但是松开先用的手指（图2，H；图4，L），来自下方的血液立刻充满了静脉，手臂的D、C部位又恢复了图1所示的状态。因此，很明显的是，静脉中血管中的血液从下端或更远端流向上端，流向心脏，而不是以相反的方向运行。虽然静脉中的一些静脉瓣并非这样完善的起作用，或者有些静脉中只有一个静脉瓣，似乎不能完全阻止血液的倒流，但是大多数的静脉瓣显然可以阻止血液倒流。而且有几处静脉中的静脉瓣不能有效地行使其功能的作用是可以忽略的，这种缺陷以排列众多的静脉瓣或相继排列的静脉瓣的有效作用用来弥补，或以其他方式来弥补。简而言之，静脉是将血液运回心脏的自由开放的通道，可以有效地阻止血液沿这条通道从心脏流出。
不过还有其他的情况应予以注意，当手臂被系紧，静脉胀起，静脉瓣显露出时，用拇指或食指压紧显露出静脉瓣的静脉，阻止来自手的血液向上流动，然后用另一只手的食指向上挤压血液，直至血液流过上方的另一静脉瓣处（图4，N）。这时两个食指挤压处之间的血管是空的，但是将压在L处的食指移开片刻，来自下方的血液立刻使这段静脉充满。再用食指压住，并且以同样的方式向上挤压血液，再移开下面的食指，这段血管像以前一样扩张。重复这样做，比如说在短时间内重复一千次。这时，计算你向静脉瓣上方挤的血量，然后用一千乘以该血量，你会发现流经静脉这一段中的血量是很大的。这时我相信也确信血液是循环的，而且是快速流动的。但是假如你认为这种实验破坏了自然状态的情况——对此我表示承认，你按照同样的方式，在尽可能长的静脉之间，并且记住血液的迅速向上流动和下面血液的迅速补充，你也会得出同样的结论。